Na izoláciu RNA sa často používa pufor citrát sodný, pretože minimalizuje hydrolýzu báz RNA z báz, čím sa stáva neoceniteľným pri purifikácii mRNA počas genomická výskum a štúdium transkripcie. Tlmivé roztoky na báze citrátov tiež pomáhajú pri detekcii antigénov v preparátoch fixovaných tkanív, pretože prerušujú zosieťovanie tvorené medzi antigénmi a fixačným médiom.
Pomocou nasledujúcich jednoduchých krokov je možné vytvoriť tlmivý roztok citranu sodného s pH 6 (kyslý) za menej ako 10 minút.
Materiály na nátriumcitrátový pufer
Na výrobu tlmivého roztoku citranu sodného je potrebných len málo materiálov. Pri kyseline citrónovej stačí 1M hydroxid sodný, destilovaná voda a kalibrovaná sonda pH. Citran sodný je voliteľný.
Vytvorenie tlmivého roztoku tiež vyžaduje 1 litrový odmerný valec, 1-litrovú odmernú banku a tri 1-litrové médiá. Nakoniec budete potrebovať magnetickú miešaciu tyčinku a magnetické miešadlo. Všetky tieto materiály možno nájsť v škole, laboratóriá na pracovisku alebo zakúpiť online alebo v obchodoch so špeciálnym tovarom.
Dve možnosti na vytvorenie vyrovnávacej pamäte
Existujú dva spôsoby výroby tlmivých roztokov citranu sodného v závislosti od dostupných materiálov.
- Ak máte kyselinu citrónovú aj konjugovanú bázu, vytvorte zásobný roztok každého z nich zmiešaním 21 gramov kyseliny citrónovej v 1 litri destilovanej vody a 29,4 gramu citranu sodného v 1 litri destilovanej vody voda.
- Ak máte po ruke iba kyselinu citrónovú, primiešajte 2,1 gramu do 1 litra destilovanej vody.
Miešanie roztokov kyseliny citrónovej a citranu sodného
Zmiešajte 82 mililitrov roztoku kyseliny citrónovej s 18 mililitrami roztoku citranu sodného. K tomu pridajte dostatok destilovanej vody, aby bol objem zmesi mierne pod 1 liter.
Úprava pH
Za jemného miešania roztoku pomocou magnetického miešadla sa pomocou 1M hydroxidu sodného upraví pH zmesi na 6,0. Potom s odmernou bankou pridajte viac destilovanej vody, aby sa celkový celkový objem roztoku upravil presne na 1. l.