Fosforečnanom pufrovaný fyziologický roztok alebo roztok PBS

PBS alebo fosfátovým tlmivým roztokom soľanka je tlmivý roztok to je obzvlášť cenné, pretože napodobňuje koncentráciu iónov, osmolaritu a pH tekutín ľudského tela. Inými slovami, je to izotonické pre ľudské roztoky, takže je menej pravdepodobné, že v biologickom, lekárskom alebo biochemickom výskume spôsobí poškodenie buniek, toxicitu alebo nežiaduce zrážanie.

Na prípravu roztoku PBS existuje niekoľko receptov. Esenciálny roztok obsahuje vodu, hydrogenfosforečnan sodný a chlorid sodný. Niektoré prípravky obsahujú chlorid draselný a dihydrogenfosforečnan draselný. EDTA sa môže tiež pridať do bunkových prípravkov, aby sa zabránilo zhlukovaniu.

Fosfátový tlmivý roztok nie je ideálny na použitie v roztokoch ktoré obsahujú dvojmocné katióny (Fe²⁺, Zn²⁺), pretože môže dôjsť k zrážaniu. Niektoré roztoky PBS však obsahujú vápnik alebo horčík. Nezabúdajte tiež, že fosfát môže inhibovať enzymatické reakcie. Pri práci s DNA si zvlášť uvedomte túto potenciálnu nevýhodu. Aj keď je PBS vynikajúci pre fyziologickú vedu, uvedomte si, že fosfát vo vzorke pufrovanej PBS sa môže vyzrážať, ak je vzorka zmiešaná s etanolom.

Typické chemické zloženie 1X PBS má konečnú koncentráciu 10 mM PO₄³⁻, 137 mM NaCI a 2,7 mM KCI. Tu je konečná koncentrácia reagencií v roztoku:

V závislosti od vášho účelu môžete pripraviť 1X, 5X alebo 10X PBS. Mnoho ľudí jednoducho kúpi PBS tlmivé tablety, rozpustí ich v destilovanej vode a upraví pH podľa potreby s kyselinou chlorovodíkovou alebo hydroxid sodný. Riešenie je však ľahké od nuly. Tu sú recepty na 1X a 10X fosfátom tlmený fyziologický roztok:

1. Soli reagencií sa rozpustia v 800 ml destilovanej vody.
2. Upravte pH na požadovanú úroveň pomocou kyseliny chlorovodíkovej. Zvyčajne to je 7,4 alebo 7,2. Na meranie pH použite pH meter, nie papier na pH alebo inú nepresnú techniku.
3. Pridajte destilovanú vodu tak, aby ste dosiahli konečný objem 1 liter.

Pre niektoré aplikácie nie je sterilizácia nevyhnutná, ale ak ju sterilizujete, vydajte roztok do alikvotov a autoklávujte 20 minút pri 15 psi (1,05 kg / cm)²) alebo použite sterilizáciu filtra.

Fosforečnanom tlmený fyziologický roztok môže byť uložené pri izbovej teplote. Môže sa tiež chladiť, ale môže sa použiť aj 5x a 10x roztok po ochladení sa vyzráža. Ak musíte koncentrovaný roztok vychladnúť, najskôr ho skladujte pri izbovej teplote, kým si nie ste istí, že sa soli úplne rozpustili. Ak dôjde k zrážaniu, zahriatím sa teplota vráti späť do roztoku. Čas použiteľnosti v chladenom roztoku je 1 mesiac.

10X je koncentrovaný alebo zásobný roztok, ktorý sa môže riediť na 1X alebo normálny roztok. 5x roztok sa musí zriediť päťkrát, aby sa dosiahlo normálne riedenie, zatiaľ čo 10X roztok sa musí riediť 10krát.

Na prípravu 1 litra pracovného roztoku 1X PBS z 10X roztoku PBS pridajte 100 ml 10X roztoku do 900 ml vody. To len mení koncentráciu roztoku, nie gram alebo molárne množstvo reagencií. Hodnota pH by nemala byť ovplyvnená.

Ďalším obľúbeným tlmivým roztokom je Dulbeccov fosfátový tlmivý roztok alebo DPBS. DPBS, ako PBS, sa používa na biologický výskum a tlmivé roztoky v rozsahu pH 7,2 až 7,6. Môže sa skladovať pri izbovej teplote. Dulbeccov roztok obsahuje nižšiu koncentráciu fosfátov. Je to 8,1 mM mM fosfátových iónov, zatiaľ čo bežný PBS je 10 mM fosfát. Recept na 1x DPBS je:

Soli sa rozpustia v 800 ml vody. Upravte pH na 7,2 až 76 pomocou kyseliny chlorovodíkovej. Konečný objem sa upraví na 1000 ml vodou. Autokláv pri 20 ° C počas 20 minút.

• Dulbecco, R.; a kol. (1954). "Tvorba plakov a izolácia čistých línií s vírusmi detskej obrny". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
• „Fosforečnanom tlmený fyziologický roztok (PBS).“ Cold Spring Harbor Protocols (2006). Cold Spring Harbor Laboratory Press.