Dva ústredné znaky v O myšiach a ľudoch sú George Milton a Lennie Small, dvaja migranti v teréne, ktorí v 30. rokoch 20. storočia hľadali poľnohospodársku prácu v južnej Kalifornii. Keď sa kniha začne, George a Lennie práve dorazili na nový ranč; Tam sa George a Lennie - a prostredníctvom nich aj čitatelia - stretávajú s fascinujúcim súborom postáv.
Lennie Small
Lennie Small je veľký migrujúci pracovník s miernym srdcom, ktorý má mentálne postihnutie. Pri vedení a bezpečnosti sa spolieha na Georga Miltona, jeho celoživotného priateľa a kolegu migrujúceho pracovníka. V prítomnosti George sa Lennie odvoláva na svojho autoritatívneho priateľa, ale keď George nie je v okolí, Lennie hovorí slobodnejšie. Niekedy necháva skĺznuť informácie, ktoré mu George povedal, aby sa držali v tajnosti, ako napríklad ich plán na kúpu pozemku.
Lennie miluje dotyk všetkého mäkkého, od látky až po srsť myši až po ženské vlasy. Je to klasický jemný gigant, ktorý sa nikdy nesnaží ublížiť, ale jeho fyzická sila neúmyselne vedie k zničeniu. Dozvedeli sme sa od Georgea, že on a Lennie museli opustiť svoju poslednú farmu, pretože Lennie sa nemohla zdržať dotýkať ženských šiat a nakoniec bola obvinená zo znásilnenia. Keď Lennie dostane šteniatko ako darček od jedného z ostatných terénnych pracovníkov, omylom ho zabije náhodou. Lennieova neschopnosť uchopiť svoju fyzickú silu vedie k problémom pre oboch mužov, najmä keď náhodou zabije Curleyho manželku.
George Milton
George Milton je dominantným vodcom a lojálnym ochrancom Lennie. Obaja muži vyrastali spolu, ale George má v priateľstve väčšiu autoritu kvôli Lennieho závislosti.
George a Lennie často hovoria o získaní vlastnej pôdy. Zdá sa, že Lennie berie tento plán veľmi vážne, ale Georgeov záväzok je menej jasný. Napríklad, namiesto toho, aby ušetril peniaze na nákup pôdy v budúcnosti, George vyhodí svoje úspory za jednu noc, zatiaľ čo sa stará o bar.
George sa niekedy sťažuje na svoju opatrovateľskú úlohu, ale je jednoznačne odhodlaný dávať pozor na Lennie. Jeho argumentácia však nikdy nie je jasne vysvetlená. Je možné, že George zostane v Lennie, pretože mu vzťah dáva pocit autority, ak jeho životu inak chýba sebaurčenie. Pravdepodobne sa tiež poteší v Lennieho známosti, pretože títo dvaja muži cestujú pravidelne a nikdy nikde nezaujímajú veľkú časť nároku.
Keď Lennie náhodou zabil Curleyho manželku, George sa rozhodol zabiť Lennie. Toto rozhodnutie je milosrdným rozhodnutím zbaviť svojho priateľa pred utrpením v rukách ostatných terénnych pracovníkov.
Curley
Curley je agresívny syn majiteľa farmy s krátkou postavou. Autoritatívne sa rozprestiera okolo farmy a hovorí sa, že je bývalým boxerom Zlatých rukavíc. Curley neustále vyberá zápasy, najmä s Lennie; jeden taký boj vedie k tomu, že Lennie drví Curleyho ruku.
Curley má vždy na rukách jednu rukavicu. Ostatní pracovníci tvrdia, že rukavica je naplnená pleťovým mliekom, aby si udržala ruku jemnú pre svoju manželku. Curley je v skutočnosti veľmi žiarlivý a ochranný voči svojej manželke a často sa obáva, že flirtuje s ostatnými robotníkmi. Potom, čo Lennie náhodou zabije Curleyho manželku, Curley vedie ostatných pracovníkov na vražednom prenasledovaní nováčika.
cukrík
Candy je údržbár starnúcej farmy, ktorý pri nehode stratil jednu zo svojich rúk pred rokmi. V dôsledku zdravotného postihnutia a jeho veku sa Candy obáva svojej budúcnosti na farme. Keď Lennie odhalí, že on a George plánujú kúpiť si vlastnú pôdu, Candy cíti, že dostala úder šťastia a ponúkne 350 dolárov, aby sa k nim pripojil. Candy, rovnako ako Lennie, skutočne verí v tento plán, a preto je voči Georgeovi a Lennie sympatický počas celej novely, dokonca aj tak ďaleko, že pomôže Georgeovi oddialiť hon na Lennie po Curleyovej manželke smrťou.
Crooks
Crooks, ktorý dostal prezývku kvôli jeho znetvorenému späť, je stabilnou rukou a jediným africkým americkým pracovníkom na ranči. Z dôvodu svojej rasy je Crooksovi zakázané žiť v stodole s ostatnými robotníkmi. Podvádzači sú horkí a cyničtí, no napriek tomu sa dobre znáša s Lennie, ktorá nezdieľa rasizmus ostatných pracovníkov.
Napriek tomu, že ho George prisahal na utajenie, Lennie hovorí Crooksovi, že on a George plánujú kúpiť pozemok. Podvodníci vyjadrujú hlboký skepticizmus. Lennie hovorí, že počul najrôznejších ľudí hovoriť o najrôznejších plánoch, ale nikto z nich sa v skutočnosti nikdy nestal.
Neskôr v tej istej scéne sa Curleyho manželka priblíži k obom mužom a koketne chatuje. Keď ju Crooks požiada, aby odišla, Curleyho žena na neho vrhla rasové epitetá a hovorí, že by ho mohla nechať unášať. Tento incident je ponižujúci pre Crookovcov, ktorí sa musia ospravedlniť Curleyovej manželke pred Lennie a Candy napriek tomu, že boli porušenou stranou.
Curleyova manželka
Curleyho žena je mladá, pekná žena, ktorej meno sa v novele nikdy nespomína. Jej manžel, Curley, je žiarlivý a nedôverčivý a často na ňu prichytáva. Má sladkú stránku, ktorú demonštruje, keď rozpráva Lennie o svojich detských snoch o filmovej hviezde, ako aj o krutom prúžku, čoho dôkazom je rasistický verbálny útok, ktorý začína na Crooks. Curleyho manželka vyvoláva vrchol knihy tým, že požiada Lennie, aby jej prehodila vlasy, a Lennie ju omylom zabije. Curleyho manželka je menej rozvinutá ako iné postavy a zdá sa, že slúži hlavne na to, aby posunula dej dopredu a vyvolala konflikty.