Ako pripraviť fyziologický roztok pufrovaný fosfátmi (PBS)

Fosfátový tlmivý roztok (PBS) je a Tlmivého roztoku ktorý sa bežne používa na imunohistochemické farbenie (IHC) a často sa používa v biologickom výskume. PBS je vodný solný roztok obsahujúci hydrogénfosforečnan sodný, chlorid sodný a v niektorých prípadoch chlorid draselný a dihydrogenfosforečnan draselný.

Imunohistochémia sa týka procesu detekcie antigénov, ako sú proteíny v bunkách a tkanivového rezu použitím princípu protilátok, ktoré sa špecificky viažu na antigény v biologickej tkaniva. Imunofluorescenčné farbenie bolo prvou metódou imunohistochemického farbenia.

Antigény sa stávajú viditeľnými, keď sú konjugované s protilátkami pomocou fluorescenčných farbív v dôsledku väzbová reakcia antigén-protilátka. Tento proces nastane, keď je aktivovaný excitačným svetlom špecifickej vlnovej dĺžky pod fluorescenčným mikroskopom.

Osmolarita a koncentrácia iónov v roztokoch zodpovedajú koncentráciám v ľudskom tele - sú izotonické.

PBS môžete pripraviť niekoľkými spôsobmi. Existuje niekoľko vzorcov. Niektoré z nich neobsahujú draslík, zatiaľ čo iné obsahujú vápnik alebo

Tento recept je pomerne jednoduchý. Je to pre 10X zásobný roztok PBS (0,1 M). Môžete však tiež pripraviť 1X zásobný roztok alebo začať s týmto 10X receptom a zriediť ho 1X. Celý proces trvá asi 10 minút a je tiež možné pridať Tween.

• Fosforečnan sodný monobázický (bezvodý)
• Hydrogenfosforečnan sodný (bezvodý)
• Chlorid sodný
• Zmena mierky a váženie lodí
• Magnetické miešadlo a miešadlo
• Sonda pH, ktorá je kalibrovaná a vhodné riešenia na úpravu pH
• 1 l odmerná banka
• Tween 20 (voliteľné)

1. Odváži sa 10,9 g dvojsytného bezvodého fosforečnanu sodného (Na2HP04), 3,2 g bezvodého dvojsýtneho fosforečnanu sodného (NaH2P04) a 90 g chloridu sodného (NaCl). Rozpustite v tesne pod 1 I destilovanej vody.
2. PH sa upraví na 7,4 a roztok sa doplní na konečný objem 1 liter.
3. Pred použitím zriedite 10X a ak je to potrebné, upravte pH.
4. Môžete pripraviť roztok PBS obsahujúci 0,5 percenta Tween 20 pridaním 5 ml Tween 20 k 1 1 roztoku.

Po príprave roztoku PBS uchovajte tlmivý roztok pri izbovej teplote.

Bezvodé činidlá môžu byť nahradené, ale budete musieť prepočítať príslušnú hmotnosť každého z nich, aby sa do nej pridali molekuly vody.

Fosfátový fyziologický roztok má mnoho použití, pretože je izotonický a netoxický pre väčšinu buniek. Môže sa používať na riedenie látok a často sa používa na vypláchnutie nádob buniek. PBS môže byť použitý ako riedidlo v rôznych metódach na sušenie biomolekúl, pretože molekuly vody v ňom budú štruktúrované napríklad okolo látky - proteínu. Bude „vysušený“ a imobilizovaný na pevný povrch.

PH zostáva stabilné a konzistentné, aby sa zabránilo deštrukcii buniek.

Tenký film vody, ktorý sa viaže na látku, bráni denaturácii alebo iným zmenám konformácie. Uhličitanové tlmivé roztoky sa môžu používať na rovnaký účel, ale s menšou účinnosťou.

PBS sa môže tiež použiť na meranie referenčného spektra pri meraní proteín adsorpcia v elipsometrii.