Polymorfizmus s obmedzenou dĺžkou fragmentu (RFLP) je molekulárna metóda genetickej analýzy, ktorá umožňuje identifikáciu jednotlivcov na základe jedinečných vzorcov reštrikčný enzým rezanie v špecifických oblastiach DNA.
Táto technológia sa tiež označuje ako RFLP analýza a využíva výhodu polymorfizmy v genetických kódoch jednotlivých ľudí. Aj keď všetci členovia druhu majú v podstate rovnaké genetické zloženie, tieto malé rozdiely spôsobujú rozdiely vo fenotype, ako je vzhľad alebo metabolizmus, medzi jednotlivcami.
Technika analýzy RFLP
Technika analýzy RFLP zahŕňa rezanie konkrétneho regiónu DNA so známou variabilitou, s reštrikčnými enzýmami, potom sa fragmenty DNA separujú elektroforézou na agarózovom géli a stanoví sa počet fragmentov a relatívna veľkosť.
Reštrikčný enzým je enzým, proteínová molekula, ktorá štiepi DNA na reštrikčných miestach. Vzorka DNA sa v podstate rozdeľuje a štiepi reštrikčnými enzýmami. Výsledné fragmenty sa rozdelia podľa ich dĺžok a vzor veľkostí fragmentov sa bude líšiť pre každú jednotlivú testovanú látku.
Celý proces RFLP vyžaduje značenie sondy, fragmentáciu DNA, elektroforézu, blotovanie, hybridizáciu, premývanie a autorádiografiu. Zistená RFLP sa vizualizuje pomocou röntgenového filmu v autorádiografii, kde fragmenty DNA je možné prezerať a analyzovať po ich separácii elektroforézou.
Žiadosť o použitie RFLP
Niektoré z aplikácií na analýzu RFLP zahŕňajú:
- Odtlačky DNA: Forenzní vedci môžu použiť RFLP analýzu na identifikáciu podozrivých na základe vzoriek dôkazov zozbieraných v mieste činu.
- otcovstva: RFLP sa používa aj pri určovaní otcovstva alebo na zisťovanie pôvodu.
- Genetická diverzita: Táto technika sa môže použiť pri štúdiu vývoja a migrácie voľne žijúcich živočíchov, pri štúdiu chovateľských vzorcov v populáciách zvierat a pri zisťovaní a diagnostike určitých chorôb.
Technika použitia RFLP detekcie variácie v genómoch je životne dôležitým nástrojom pri mapovaní genómu a analýze genetických chorôb. Ak sa v určitom chromozóme hľadá miesto konkrétneho génu choroby, vedci by to urobili analyzovať DNA členov rodiny s chorobou a potom hľadať podobné vzorce dedičnosti v RFLP alely.
Akonáhle je gén choroby lokalizovaný, vykonávanie RFLP analýzy na iných členoch rodiny by mohlo odhaliť nosič mutantných génov alebo signalizovať celkové riziko ochorenia. Je dôležité si uvedomiť, že technika RFLP sa v súčasnosti často nepoužíva, keďže novšie, robustnejšie techniky sa používajú na analýzu DNA vo forenznej vede av niekoľkých ďalších oblastiach.
Negatívne aspekty pre RFLP
Technika analýzy RFLP je, žiaľ, zdĺhavá a pomalá. Okrem požiadavky na veľké množstvo vzorky DNA - vzorka by obyčajne musela byť približne o veľkosti štvrtiny, čo je relatívne veľké pre vzorky DNA - proces, od značenia sondy po umývanie a autorádiografiu, môže trvať až celý mesiac do dokončené.
Výsledky projektu Human Genome do značnej miery nahradili potrebu RFLP. Projekt umožnil stanovenie celej sekvencie DNA nájdenej v ľudských bunkách, v ľudskom genóme a na identifikáciu všetkých génov v ľudskom genóme.